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什么是液相色谱以及它是如何工作的

发布时间:2022-01-13      点击次数:600
液相色谱按其分离机理,可分为四种类型:吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱、凝胶色谱法。
液相色谱是一种色谱技术,用于分离和分析溶液中混合物的化学成分,以确定是否存在或不存在特定成分,如果存在,则存在多少。高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是使用高色谱分辨率进行高效分离的高性能分析。分离的组分也可以在检测后使用馏分收集器分离,作为纯化的手段。HPLC有多种不同的配置,可用于分离分子量从半挥发性小分子到几万千道尔顿的大蛋白生物分子的溶解组分。液相色谱法是一种非常流行的分析技术,广泛用于环境监控,农业,医药领域。
流动相通常是溶剂,借助高压泵将样品输送并且通过系统。它在分离过程中也起着至关重要的作用。混合物中对流动相具有较高亲和力的组分将快速迁移通过色谱柱,而与固定相之间几乎没有相互作用。当组分的带离开色谱柱或从色谱柱洗脱时,检测器将给出与组分浓度成正比的响应。进样与检测之间的时间称为保留时间。对于一组给定的色谱条件,组分的保留时间将非常明确,可以与鉴定标准进行比较。
在反相色谱法中,极性较小的分析物会优先分配到非极性固定相中,并且保留时间更长。数据采集系统将检测器响应记录为色谱图中保留时间的函数。通常对色谱图中记录的峰进行积分以确定峰面积,该峰面积与样品中存在的组分的浓度成正比。
自动进样器将样品注入流动相后,在色谱柱中进行分离过程。色谱系统的选择性对色谱分辨率的影响最大,应针对所研究的应用和组件进行定制。选择性可以通过改变流动相(不同溶剂)或固定相中存在的特定化学官能团(改变色谱柱类型)的电化学强度来改变。
 
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