多肽蛋白分析在使用时需要注意哪些

　　多肽蛋白分析产品实例：脱氢睾丸激素、腺(嘌呤核)苷、缩二氨酸、抗菌素、糖肽、人胰生长激素、胰蛋白酶抑制剂、β-乳球蛋白、尿酸、免疫球蛋白、类叶红素、人胰岛素B链、赖氨酸、苏氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等产品的分离纯化。
 

　　多肽蛋白分析会遇到的问题：
 

　　1、多肽样品在新的硅胶基质色谱柱上不出峰或者峰面积异常小，这是为什么？
 

　　这是因为全多孔球形硅胶柱上的非特异吸附位点对多肽产生死吸附从而导致不出峰。
 

　　色谱柱中非特异性吸附位点主要来源于残留的硅醇基、硅胶中的残留重金属、键合相脱落后暴露的硅羟基，柱管内壁没有被钝化的位点。这些都会对多肽样品有较强的非特异性吸附。
 

　　其实在开始使用新色谱柱时，对生物样品这样的非特异性吸附会比较严重，可以对色谱柱进行高浓度样品饱和处理。在正式检测前预先进样，使样品在柱子上累积，覆盖住这样的位点，才会使我们以后的分析有好的色谱图。建议隔一分钟进一次样，连续进十几针，用过量样品覆盖掉非特异性吸附位点。等峰面积，峰形稳定后就可以正式检测样品。
 

　　2、检验多肽的色谱柱出现柱压升高，柱效下降该如何解决？
 

　　日常对色谱柱冲洗维护可以遵循色谱柱出厂说明书，但是在分析多肽等蛋白质样品时还容易出现一种现象：蛋白污染。主要是柱头端填料出现结块，如果出现蛋白污染，建议使用乙腈-水-三fu乙酸 = 50-50-0.1小流速反向冲洗60倍柱体积或者反向冲洗过夜。